Pauley est née le 27 mars 1969 à La Nouvelle Orléans, Lousiane[USA]. 
Pauley Perrette déménage souvent dans son enfance, selon les mutations de son père, se qui ne l'empêche pas d'obtenir une maitruse de criminologie. Elle étudie également la socioligie et la phsycologie et reste passioné par la science medico-légale.Toute fois c'est vers une carrière de comédienne qu'elle se tourne dès 1994 à la télévision. Elle comence dans des série comme Fraisier et Demain a la une, avant d'obtenir un rôle régulier dans la deuxième sason de Murder One [1996]. Apèrs de multiples autre apparition [Philly,Dawson,24,Les experts] Pauley Perrette retrouve un rôle régulier de spécialiste en informatique dans Ncis : Enquêtes spéciales [2003].